Yangi Koronavirus (SARS-CoV-2) Multipleks Real-Time PCR to'plami
Ushbu yuqori sezgir, foydalanishga tayyor PCR to'plami uzoq muddatli saqlash uchun liyofillangan formatda (muzlatib quritish jarayoni) mavjud.To'plamni xona haroratida tashish va saqlash mumkin va bir yil davomida barqaror.Premiksning har bir trubkasida PCR kuchaytirilishi uchun zarur bo'lgan barcha reagentlar, jumladan, teskari transkriptaza, Taq polimeraza, primerlar, problar va dNTPs substratlari mavjud.Unga faqat 13ul distillangan suv va 5ul ekstraksiya qilingan RNK shablonini qo'shish kerak, keyin uni PCR asboblarida ishga tushirish va kuchaytirish mumkin.
qPCR mashinasi quyidagi talablarga javob berishi kerak:
1. 8 ta chiziqli PCR trubkasi hajmi 0,2 ml
2. To'rtdan ortiq aniqlash kanaliga ega bo'ling:
| Kanal | Qo'zg'alish (nm) | Emissiya (nm) | Oldindan kalibrlangan bo'yoqlar |
| 1. | 470 | 525 | FAM, SYBR Green I |
| 2 | 523 | 564 | VIC, HEX, TET, JOE |
| 3. | 571 | 621 | ROX, TEXAS-RED |
| 4 | 630 | 670 | CY5 |
PCR platformalari:
7500Real-Time PCR tizimi, Biorad CF96, iCycler iQ™ real vaqtda PCR aniqlash tizimi, Stratagene Mx3000P, Mx3005P
Yangi Koronavirus nuklein kislotasini aniqlash reagentini sovuq zanjirli tashish qiyinligi
An'anaviy nuklein kislotani aniqlash reagentlari uzoq masofaga tashilganda, reagentlardagi fermentning bioaktivligini ta'minlash uchun (-20 ± 5) ℃ sovuq zanjirni saqlash va tashish talab qilinadi.Harorat me'yorga yetishiga ishonch hosil qilish uchun har bir quti nuklein kislotasi sinov reaktivi uchun hatto 50 g dan kam bo'lsa ham, bir necha kilogramm quruq muz kerak bo'ladi, lekin u faqat ikki yoki uch kun davom etishi mumkin.Sanoat amaliyoti nuqtai nazaridan, ishlab chiqaruvchilar tomonidan chiqarilgan reagentlarning haqiqiy og'irligi idishning 10% dan kam (yoki bu qiymatdan ancha past).Og'irlikning katta qismi quruq muz, muz paketlari va ko'pikli qutilardan keladi, shuning uchun transport narxi juda yuqori.
2020-yil mart oyida COVID-19 chet elda keng miqyosda tarqala boshladi va yangi Koronavirus nuklein kislotasini aniqlash reaktiviga talab keskin oshdi.Sovuq zanjirda reagentlarni eksport qilishning yuqori narxiga qaramay, ko'pchilik ishlab chiqaruvchilar uni katta miqdorda va yuqori foyda tufayli qabul qilishlari mumkin.
Biroq, pandemiyaga qarshi mahsulotlar uchun milliy eksport siyosatini takomillashtirish, shuningdek, odamlar oqimi va logistika ustidan milliy nazoratni yaxshilash bilan reagentlarni tashish vaqtini uzaytirish va noaniqlik mavjud bo'lib, bu mahsulotning jiddiy muammolariga olib keldi. transport orqali.Kengaytirilgan tashish vaqti (taxminan yarim oylik transport vaqti juda keng tarqalgan) mahsulot mijozga yetib kelganida mahsulotning tez-tez ishdan chiqishiga olib keladi.Bu nuklein kislota reagentlarini eksport qiluvchi korxonalarning aksariyatini bezovta qildi.
PCR reaktivi uchun liyofillangan texnologiya Koronavirus nuklein kislotasini aniqlash reagentini butun dunyo bo'ylab tashishga yordam berdi.
Liyofilizatsiyalangan PCR reagentlari xona haroratida tashilishi va saqlanishi mumkin, bu nafaqat transport xarajatlarini kamaytiradi, balki tashish jarayonidan kelib chiqadigan sifat muammolarini ham oldini oladi.Shuning uchun reaktivni liyofilizatsiya qilish eksportni tashish muammosini hal qilishning eng yaxshi usuli hisoblanadi.
Liyofilizatsiya eritmani qattiq holatga keltirishni, so'ngra vakuum sharoitida suv bug'ini sublimatsiya qilishni va ajratishni o'z ichiga oladi.Quritilgan eritma bir xil tarkibga va faollikka ega bo'lgan idishda qoladi.An'anaviy suyuq reagentlar bilan solishtirganda, Liming Bio tomonidan ishlab chiqarilgan to'liq komponentli liyofillangan Koronavirus nuklein kislotasini aniqlash reaktivi quyidagi xususiyatlarga ega:
Juda kuchli issiqlik barqarorligi:60 kun davomida 56 ℃ da stend bilan ishlov berish mumkin va reaktivning morfologiyasi va ishlashi o'zgarishsiz qoladi.
Oddiy haroratda saqlash va tashish:sovuq zanjirga ehtiyoj yo'q, yopishdan oldin past haroratda saqlash kerak emas, sovuq saqlash joyini to'liq bo'shating.
Foydalanishga tayyor:barcha komponentlarni liyofilizatsiya qilish, tizim konfiguratsiyasiga ehtiyoj yo'q, ferment kabi yuqori viskoziteli komponentlarni yo'qotishdan qochish.
Bitta trubkadagi multipleks maqsadlar:aniqlash maqsadi virus genovariatsiyasini oldini olish uchun yangi koronavirus ORF1ab geni, N geni, S genini qamrab oladi.Noto'g'ri salbiyni kamaytirish uchun inson RNase P geni namuna sifatini nazorat qilish uchun klinik ehtiyojni qondirish uchun ichki nazorat sifatida ishlatiladi.
